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关于辣根过氧化物酶
源叶生物 / 2020-11-03

 一、简介

辣根过氧化物酶,英文名Horseradish peroxidase,简称HRP,酶学编号EC1.11.1.7;是来源于辣根的一组具有一定酶活活性的同工酶,其中辣根过氧化物酶同工酶CHRP C)含量最高,在辣根的根部含量最为丰富。

 

 

二、结构

辣根过氧化物酶主要由糖蛋白(酶蛋白)和铁(III)原卟啉IX(辅基)组成。糖蛋白中糖含量一般是18~22%。由于辣根过氧化物酶的酶蛋白和辅基分别在紫外波长275nm403nm下有最大吸收峰,分离得到的HRP都有一个OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)。RZ值的大小表示了酶的纯度,纯度较高的HRPRZ值一般在3.0以上,RZ值越小,酶纯度越低。源叶生物根据RZ值的不同,分别有以下几款对应的产品:

货号S10062  过氧化物酶(辣根) RZ3,酶活≥300u/mg

 

 

货号S10063  过氧化物酶(辣根) RZ2.5,酶活≥250u/mg

 

 

货号S10064  过氧化物酶(辣根) RZ1.5,酶活≥150u/mg

 

 

HRP是一组同工酶,由于HRP C含量最高,对HRP C结构研究的也最为详细。HRP C是一组单亚基糖蛋白,包含308个氨基酸残基和8个糖链,每分子HRP C中有2分子Ca 2+ 1分子(III)原卟啉IX辅基和4对二硫键,相对分子质量约为44 000辣根过氧化物酶的作用机制,酶学特性,等电点等都与其结构息息相关。

三、酶的作用机制和酶学特性

HRP可以催化底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)生成自由基和水,

 

 

供氢体有很多,如芳香族化合物,酚类,吲哚,胺类和磺酸盐类等。在实际应用中,供氢体DH2多选择溶液为无色的物质,通过反应生成有色物质.D,从而通过对反应后溶液颜色深浅的测定,来得到需要的数值。常用的供氢体DH2TMB(源叶货号:S19126ABTS(源叶货号:S19198和焦性没食子酸(源叶货号:S30154

由于供氢体多种多样,针对不同的供氢体,HRP反应的最适pH都不太一样,但多数是在5.0左右,反应的温度一般就是常温25℃左右。

三、应用

由于HRP性质稳定,天然来源丰富,且分子量小,容易制得活性较高的纯酶,所以应用较为广泛。

    1. HRP是目前在ELISA中应用最为广泛的标记用酶之一,主要是因为其容易制得,价格相对较低,且性质稳定,耐热和有机溶剂,与抗原或抗体偶联后,活性损失很小。

2. HRP也常用与污水处理。工业废水中含有大量的苯酚,双酚A等分类和芳香胺类化合物,等环境污染较大,HRP可以将这些污染物作为底物,氧化成自由基,自由基在聚集成沉淀聚合物,从而大大降低对环境的污染。

3. HRP近几年来被研究用作食品添加剂。由于HRP本身无毒无害,反应条件温度,反应易控制,近年来被研究用于食品的保鲜,解毒和检测等领域。

4. 检测领域:HRP可以与葡萄糖氧化酶(源叶货号S10020联用,用以检测葡萄糖含量。

 

上海源叶生物科技有限公司

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